在哺乳動物細胞活力與濃度的自動化檢測中，Chemometec 公司的 NucleoCounter® NC-200™細胞計數(shù)儀是常用工具，而耗材的規(guī)范選擇與使用直接決定檢測結(jié)果的準確性。本文將圍繞該儀器計數(shù)過程中的核心耗材、耗材作用及完整操作流程展開，兼顧專業(yè)性與可讀性，為科研人員提供清晰指引。

一、核心耗材及作用

在 NucleoCounter® NC-200™的 “活力與細胞計數(shù) - 方法 2 檢測"（Viability and Cell Count – Method 2 Assay）中，涉及三類關(guān)鍵耗材，各自承擔不可替代的角色：

Via1-Cassette™（細胞計數(shù)卡）

這是檢測的核心載體耗材，主要作用是裝載細胞懸液并配合儀器完成檢測。它能與儀器的熒光檢測系統(tǒng)適配，讓儀器通過計數(shù)卡內(nèi)的樣本，精準捕捉 Acridine Orange（AO，吖啶橙）和 DAPI（4',6 - 二脒基 - 2 - 苯基吲哚）的熒光信號，進而區(qū)分總細胞與非活細胞，為后續(xù)計算提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

待檢測細胞樣本

即需要分析的哺乳動物細胞懸液，是檢測的核心對象。需注意，樣本需來自生物反應器培養(yǎng)（尤其適用于長期培養(yǎng)且未更換培養(yǎng)基的細胞），其狀態(tài)（如是否存在 “類細胞小體"）會直接影響檢測方法的選擇 —— 方法 2 正是為應對長期培養(yǎng)細胞的特殊熒光模式而設計。

輔助調(diào)整耗材（生長培養(yǎng)基 / PBS）

這類耗材用于校準細胞濃度，確保樣本符合儀器檢測要求。當細胞濃度高于 5×10? cells/ml 時，需用生長培養(yǎng)基或 PBS 稀釋；當濃度低于 5×10? cells/ml 時，需通過離心收集細胞沉淀，再用生長培養(yǎng)基或 PBS 重懸濃縮，避免因濃度過高導致計數(shù)重疊、過低導致結(jié)果不準確。

二、細胞計數(shù)完整流程

基于上述耗材，NucleoCounter® NC-200™的細胞計數(shù)過程可分為 5 個關(guān)鍵步驟，操作簡單且自動化程度高：

儀器與程序準備

啟動儀器的 NucleoView 軟件，在菜單中選擇 “Viability and Cell Count – Method 2 Assay"；若需要追溯樣本，可在界面中輸入對應的 Sample ID（樣本編號），便于后續(xù)數(shù)據(jù)管理。

細胞懸液混勻

將裝有細胞樣本的容器顛倒或輕彈，確保細胞均勻分布 —— 這一步能避免細胞聚集形成 “團塊"，防止儀器誤將多個細胞計為一個，或漏計聚集在底層的細胞。

Via1-Cassette™裝載樣本

手持細胞計數(shù)卡，將其吸頭端插入混勻后的細胞懸液中，輕輕按壓計數(shù)卡的活塞，讓樣本自然吸入計數(shù)卡的檢測腔室，完成裝載（注意避免吸入氣泡，氣泡會干擾熒光信號檢測）。

啟動儀器檢測

立即將裝載好樣本的計數(shù)卡放入 NucleoCounter® NC-200™的檢測倉內(nèi)，關(guān)閉倉門后按下 “RUN" 鍵，儀器將自動開始熒光掃描與信號分析。

結(jié)果讀取與校正

檢測約 1 分鐘后，儀器界面會直接顯示兩項核心結(jié)果：細胞活力（以百分比表示）和總細胞濃度（單位為 cells/ml）。若檢測前已在軟件中輸入樣本的稀釋倍數(shù)或濃縮體積，儀器會自動計算并顯示原始細胞濃度，無需手動換算。

三、耗材使用與計數(shù)的關(guān)鍵注意事項

為進一步確保結(jié)果可靠，使用耗材與操作過程中需關(guān)注兩點核心要求：

若樣本中存在較多細胞碎片，且僅需計數(shù) “有核細胞"，不可繼續(xù)使用方法 2—— 此時應切換至 “Aggregated Cell Assay"（聚集細胞檢測），避免儀器將無核碎片誤計為細胞；

首、次檢測新細胞系時，需驗證計數(shù)準確性：點擊儀器圖像界面右下角的 “overlay" 按鈕，標記儀器識別的計數(shù)細胞，目視檢查是否有大量細胞漏計或碎片誤計；若發(fā)現(xiàn)計數(shù)范圍（門控）不合適，可通過 “Protocol Adaptation Wizard"（方案適配向?qū)В┱{(diào)整門控，覆蓋目標細胞群體（排除碎片和過大雜質(zhì)）后保存新方案，后續(xù)檢測可直接使用。

拓展閱讀
丹麥ChemoMetec 是專注于生物醫(yī)藥行業(yè)細胞計數(shù)和分析設備制造商，主要產(chǎn)品為各種細胞計數(shù)儀器和配套耗材。
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